Problemas comuns em HPLC (4)

2026-08-21

Problemas e soluções comuns (Parte 1)

A contrapressão da coluna requer atenção especial durante as operações de HPLC. Uma contrapressão estável está intimamente relacionada à qualidade do formato do pico, à eficiência da coluna, ao desempenho da separação e ao tempo de retenção. Contrapressão estável não significa um valor fixo constante; em vez disso, a faixa de flutuação da pressão deve estar dentro de 345 kPa ou 50 PSI. Variações de pressão suaves e lentas são aceitáveis em eluição em gradiente. Pressões excessivamente altas ou excessivamente baixas são consideradas falhas relacionadas à pressão.

01 Aumento súbito de pressão

Geralmente, é causado por um bloqueio no fluxo de água. Realize a solução de problemas por etapas, conforme descrito a seguir:

(1) Desconecte a porta de entrada da bomba de vácuo. O tubo de PEEK está cheio de líquido. Posicione o tubo de PEEK abaixo do frasco reservatório de solvente e observe se o líquido goteja livremente. Se o líquido não gotejar ou gotejar muito lentamente, o filtro de entrada de solvente está obstruído.

SoluçãoMergulhe o filtro em ácido nítrico a 30% por meia hora e, em seguida, enxágue abundantemente com água ultrapura. Se o líquido pingar livremente, o filtro de entrada do solvente está normal; prossiga para a próxima verificação.

(2) Desconecte a conexão de entrada da coluna. Se a pressão não cair significativamente, a válvula de injeção de seis portas está obstruída. SoluçãoLave a válvula de seis vias. Se a pressão voltar ao normal, continue a resolução de problemas.

(3) Desconecte a extremidade de saída da coluna. Se a pressão permanecer alta, a coluna HPLC está bloqueada.

Solução:

- Para obstruções causadas por sais tamponantes: lave com água a 95% até que a pressão retorne ao normal.

- Para bloqueios causados por substâncias fortemente retidas: lave com um solvente de fase móvel mais forte que a fase móvel de trabalho atual até que a pressão se estabilize.

Se a pressão não diminuir após lavagem prolongada com os solventes acima, inverta a conexão da entrada e da saída da coluna no instrumento e lave com a fase móvel. Se a retrolavagem ainda não reduzir a pressão, considere substituir o filtro de entrada da coluna. Observação: O manuseio inadequado pode facilmente degradar a eficiência da coluna, portanto, esta medida deve ser usada com moderação. Substitua a coluna de HPLC se o problema persistir.

Configuração de vazão incorreta: redefina para a vazão correta.
Composição incorreta da fase móvel: diferentes proporções da fase móvel resultam em diferentes coeficientes de viscosidade. Fases móveis com maior viscosidade geram maior pressão no sistema. Quando possível, utilize solventes de menor viscosidade ou reajuste as proporções da fase móvel.
Desvio do ponto zero da pressão do sistema: recalibre o ponto zero do sensor de pressão.

02 Aumento gradual da pressão

O aumento gradual da pressão geralmente é causado pela contaminação da coluna, resultante do uso prolongado ou da adsorção da amostra.

SoluçãoRealize uma retrolavagem na coluna com isopropanol puro a 0,2 mL/min durante 12 horas. Observe se a pressão diminui. Caso a pressão diminua, reconecte a coluna na direção normal e realize uma retrolavagem com metanol puro a 0,2 mL/min durante 2 horas para remover completamente o isopropanol residual. A coluna poderá então retornar à operação normal.

03 Baixa Pressão

Causada com maior frequência por vazamento do sistema. SoluçãoInspecione todas as conexões, especialmente as conexões em ambas as extremidades da coluna cromatográfica; aperte as conexões com vazamento. Remova a coluna e aperte as conexões com o torque apropriado ou instale anéis de PTFE.
Bolhas de ar presas dentro da bomba. Os sintomas geralmente incluem pressão instável e flutuante; o aprisionamento severo de ar pode impedir a bomba de aspirar a fase móvel.
SoluçãoAbra a válvula de purga e faça a lavagem com uma vazão de 3 a 5 mL/min. Se o problema persistir, remova as bolhas de ar manualmente através da válvula de purga usando uma seringa.
Sem fluxo de fase móvel: verifique o volume da fase móvel nos reservatórios de solvente, confirme se os filtros de entrada de solvente estão submersos no líquido e verifique o estado de funcionamento da bomba.