Picos com formato inadequado em compostos básicos? Estudo de caso prático de HPLC para resolução de problemas.

                                                           
Em valores de pH baixos, especialmente abaixo de 2,5, a ionização de grupos silanol livres em substratos de gel de sílica pode ser amplamente suprimida. Isso impede interações secundárias entre silanóis livres e analitos básicos, resultando em uma melhora notável no formato do pico de compostos básicos.

Caso 2: Cloridrato de Dioxoprometazina
                             
     
                                                                               

• Coluna cromatográfica: Caprisil C18, 5 μm, 100 Å, 250 × 4,6 mm
• Nº de catálogo: CE553-C18
• Fase móvel: Tampão acetato (Dissolver acetato de amônio para preparar uma solução aquosa 0,05 mol/L (1000 mL), adicionar 1 mL de trietilamina e ajustar o pH para 6,5 ​​com ácido acético glacial) / Acetonitrila = 75 / 25
• Taxa de fluxo: 1,0 mL/min
• Volume de injeção: 10 μL
• Temperatura da coluna: Temperatura ambiente
• Detector: Detector UV configurado para 258 nm
• Analito: Cloridrato de dioxoprometazina
  
  
  Em condições ácidas, os cátions ionizados da trietilamina ou dietilamina na fase móvel ligam-se aos grupos silanol livres. Isso bloqueia interações secundárias entre compostos básicos e silanóis livres. Portanto, a trietilamina e a dietilamina são comumente adicionadas às fases móveis como supressores de silanol (supressores de cauda) para a análise de compostos básicos, visando otimizar o formato dos picos.
  
  Caso 3: Hidrato de cloridrato de berberina

                                                     

• Coluna cromatográfica: Caprisil C18-B, 5 μm, 100 Å, 250 × 4,6 mm
• Nº de catálogo: CE553-C18-B
• Fase móvel: Solução de fosfato de hidrogênio dipotássico 8 mmol/L (pH 7,0) / Acetonitrila = 1 / 1
• Taxa de fluxo: 1,0 mL/min
• Volume de injeção: 5 μL
• Temperatura da coluna: Temperatura ambiente
• Detector: Detector UV a 254 nm
• Analito: Hidrato de cloridrato de berberina
                                         
  
  A adição de sais tampão em concentrações suficientemente altas à fase móvel também pode melhorar o formato do pico de compostos básicos. Os íons metálicos carregados positivamente dos sais tampão envolvem os grupos silanol livres, o que bloqueia efetivamente as interações secundárias entre os compostos básicos e os silanóis livres.
  
  
  Caso 4: Cloridrato de Moxifloxacina
                         
  
  
• Coluna cromatográfica: Caprisil C18-P, 5 μm, 100 Å, 250 × 4,6 mm
• Nº de catálogo: CE553-C18-P
• Fase Móvel: Metanol / Tampão fosfato (Dissolver 0,5 g de bissulfato de tetrabutilamônio e 1,0 g de di-hidrogenofosfato de potássio, adicionar 2 mL de ácido fosfórico e, em seguida, diluir com água até 1000 mL) = 28 / 72
• Taxa de fluxo: 1,3 mL/min
• Volume de injeção: 10 μL
• Temperatura da coluna: Temperatura ambiente
• Detector: Detector UV a 280 nm
• Analito: Cloridrato de Moxifloxacina
  
  A adição de reagentes de pares iônicos à fase móvel é outra estratégia eficaz para a análise de compostos básicos. Os analitos formam pares iônicos com os reagentes de pares iônicos, o que elimina interações secundárias com grupos silanol livres. Essa abordagem melhora significativamente a simetria dos picos e a retenção dos analitos, tornando-se uma opção ideal para compostos básicos altamente polares.
  
  Caso 5: Paracetamol e Cafeína
     
  
  
• Coluna cromatográfica: Caprisil C18-B, 5 μm, 100 Å, 250 × 4,6 mm
• Nº de catálogo: CE553-C18-B
• Fase móvel: Metanol / Água = 40 / 60
• Taxa de fluxo: 1,0 mL/min
• Volume de injeção: 20 μL
• Temperatura da coluna: Temperatura ambiente
• Detector: Detector UV a 216 nm
• Analitos: Paracetamol, Cafeína
  
  
  
  Compostos básicos tendem a sofrer interações secundárias com grupos silanol livres na sílica gel, o que geralmente causa um acentuado alargamento da cauda do pico. Portanto, durante o processamento do substrato de sílica, a desativação alcalina e o tratamento de bloqueio das extremidades são cruciais. Quanto mais completo for o processo de bloqueio das extremidades, maior será a inércia da coluna e mais adequada ela se tornará para a análise de compostos básicos.
  A coluna Caprisil C18-B, utilizada no Caso 5, apresenta uma fase estacionária com desativação alcalina completa, alta carga de carbono, alta densidade de ligação e terminação multicamadas. Para a análise de compostos básicos, ela proporciona picos com simetria perfeita, mesmo em sistemas de fase móvel simples, como misturas de acetonitrila-água ou metanol-água.